外泌體（Exosomes）提取試劑盒-細胞培養(yǎng)上清4ml/T

產(chǎn)品概述product description

總外泌體(Exosomes) 提取試劑盒(細胞培養(yǎng)上清用)適用于從各種原代或傳代培養(yǎng)細胞培養(yǎng)上清樣品中提取總外泌體。不需要超速離心,僅需通過簡單的常規(guī)離心即可從樣本中獲取大量結(jié)構(gòu)完整的外泌體，具有快速簡單，提取效率高的特點，可節(jié)省更多的實驗時間和樣本。提取的外

泌體可根據(jù)實驗目的用于后續(xù)的多種實驗，應用范圍廣 泛。外泌體是活細胞分泌的來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體)的膜性小囊泡,直徑約為30-150nm, 天然存在于血液、唾液、尿液和母乳等各種體液中，研究發(fā)現(xiàn)，Exosome內(nèi)含有 與細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)、mRNA和microRNA, 并且exosome能夠通

過生物屏障,在細胞間傳遞功能性核酸分子,從而發(fā)揮各種生物學功能。外泌體囊泡已經(jīng)成為細胞間通訊的重要介質(zhì)，參與原核生物和高等真核生物細胞之間的生物信號傳遞,以調(diào)節(jié)不同范圍的生物過程。外泌體囊泡的病理生理作用開始在包括癌癥、感染性疾病和神經(jīng)變性疾病在內(nèi)的疾病中得到充分認識，顯現(xiàn)了

外泌體作為疾病的早期診斷、治療干預的潛在新靶點的巨大應用前景。此外, 未修飾和工程化的外泌體囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應用價值。傳統(tǒng)的體外培養(yǎng)的細胞中分離和提取exosome的主要方法是超速離心法，這種方法缺點是耗時耗力，往往需要30-70個小時， 每次最多只能處理6個樣品，需要大量的

起始材料，而且產(chǎn)量不高。生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒系列產(chǎn)品，可以通過簡單離心快速高效獲得高純度外泌體顆粒。本試劑盒提取的外泌體完好無缺，能用于各種功能研究、蛋白分析及RNA分析、電鏡分析、NTA粒徑分析等下游實驗應用。本試劑盒按每個樣本處理4ml細胞培養(yǎng).上清計,每

個50T試劑盒大約可以用于提取200m|細胞培養(yǎng)上清。如果需要處理大量的細胞培養(yǎng)上清，將提取液按細胞培養(yǎng).上清體積的1: 4加入細胞培養(yǎng).上清即可。還可以提供- -小時快速提取獲得各種樣本外泌體的快速提取試劑盒(相關(guān)產(chǎn)品: BB-3903)。

保存溫度

2-8°C

注意事項

1.低溫有沉淀析出的話可以在37°C短時間水浴溶解，搖勻后使用。

2.試劑拆封后請盡快使用完!

有效期

檢測方法

外泌體研究

適用樣本

細胞培養(yǎng)上清

產(chǎn)品特點

1.使用方便，無需超速離心，省時省力;

2.純度高，富集大,應用范圍廣;

3.獲取的Exosome結(jié)構(gòu)和功能完整;

4.穩(wěn)定性好，便于運輸，便于保存。

產(chǎn)品應用

外泌體研究

儀器準備

1.離心機

2.移液器

3.冰箱

4.冰盒

耗材準備

1.離心管

2.吸頭

3.- -次性手套

使用注意事項

1.不同細胞分泌的外泌體數(shù)量差異極大,請根據(jù)實際情況選擇培養(yǎng)基樣品的量,根據(jù)下游應用和參考文獻確定。條件允許

的情況下采用盡可能多的細胞培養(yǎng)上清。

2.-般巨噬細胞、 淋巴細胞、造血細胞、胰腺癌細胞等分泌外泌體較多,其它細胞樣本建議每個樣培養(yǎng)基上清用量不少于

8 ml。常規(guī)的細胞樣本最佳培養(yǎng)上清上樣量為15-20 m|及以上,條件允許的情況下采用盡可能多的細胞培養(yǎng)上清。

3.條件允許的情況下可以將細胞培養(yǎng)上清濃縮后再提取外泌體。

使用方法

1.收集4ml待提取的培養(yǎng)基樣品，置2-8°C保存。

2.將樣品在4°C條件下，3000xg離心15分鐘。 棄沉淀，收集上清。

3.小心將上清移入另-干凈離心管中。

4.將樣品在4°C條件下，10000xg離心20分鐘。 棄沉淀，收集上清。

5.小心將上清移入另一干凈離心管中。

6.在4 ml.上清中加入1 ml提取液A,蓋緊離心管蓋，上下顛倒混勻1分鐘左右，使液體充分混勻。

7.置2-8C冰箱靜置過夜。

8. 在4°C條件下, 10000xg離心60分鐘。

9.小心移除上清,收集沉淀。

10.取50-100 u外泌體保存液將沉淀重懸,即得到外泌體樣品。

11.將外泌體樣本-80°C保存或直接用于下游應用。

常見問題分析

1.無外泌體血清培養(yǎng)基(或者無血清培養(yǎng)基)在什么時候使用?

細胞在正常含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)-定的時間后, 細胞融合度約為60%-70%時，移去原有含血清的培養(yǎng)基,換成新鮮的

無外泌體血清培養(yǎng)基(或者無血清培養(yǎng)基)，繼續(xù)培養(yǎng)24-48 h,細胞融合度達到80%-95%左右時收取上清，該上清液即

可用于提取外泌體。