內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒（藍(lán)色熒光）

產(chǎn)品概述product description

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒是利用E系列探針進(jìn)行內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的E01內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色探針為藍(lán)色熒光標(biāo)記的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)探針，具有

373nm/430nm-640nm的激發(fā)/發(fā)射波長。E系列探針是一-種細(xì)胞滲透型的對活細(xì)胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體進(jìn)行選擇性染色的- -類新型熒光染料,該系列探針可以選擇性標(biāo)記內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。只需簡單孵育細(xì)胞,即可穿過細(xì)胞膜并直接聚集在活性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上?？捎行?biāo)記活細(xì)胞。- -旦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)被染色后,還能根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求進(jìn)行固定(醛類固定劑如甲醛)和透化(醛類去污劑如Triton X-100)，探針依然維持在細(xì)胞內(nèi)。

保存溫度

-20°C避光

注意事項(xiàng)

1.有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。

2.試劑拆封后請盡快使用完!

有效期

6個(gè)月.

檢測方法

熒光顯微鏡/激光共聚焦

適用樣本

動物細(xì)胞

產(chǎn)品應(yīng)用

熒光顯微鏡/激光共聚焦

儀器準(zhǔn)備

1.流式細(xì)胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦

2.離心機(jī)

3.移液器

5.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液2.HBSS

耗材準(zhǔn)備

1.離心管

3.-次性手套

使用注意事項(xiàng)

1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。

2.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

3.染色后:立即進(jìn)行分析。

4.染色時(shí)間根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整。

使用方法

1、染色工作液配制:

根據(jù)樣本數(shù)量，用染料稀釋液將BBcellProbe⑧ E01熒光染料10倍稀釋,再用HBSS緩沖液或者相應(yīng)的培養(yǎng)基50-500倍稀

釋(對于后續(xù)需要做固定或透化的樣本, 20-100倍稀釋) ,配制成染色工作液。

2、細(xì)胞染色

2.1 對于貼壁細(xì)胞

1)培養(yǎng)皿/培養(yǎng)板準(zhǔn)備細(xì)胞樣本。

2)待細(xì)胞生長到合適豐度,吸除培養(yǎng)液,用HBSS緩沖液洗滌細(xì)胞,加入適量37°C預(yù)熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下

孵育15分鐘~ 40分鐘(具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定,需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化)。

3)利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液。

4)熒光顯微鏡(含合適濾片)或激光共聚焦顯微鏡下觀察。激發(fā)/發(fā)射波長為373 / 430 nm。使用DAPI濾光片或紫外長

波通(UV longpass)濾光片。

或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟。

2.2對于懸浮細(xì)胞

1)離心,吸除上清。

2)利用37°C預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞，于生長狀態(tài)下孵育15分鐘~ 40分鐘(具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定,需預(yù)實(shí)

驗(yàn)優(yōu)化)

3)離心,吸除染色液,加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

4)置于熒光鏡下觀察?；蚣す夤簿劢癸@微鏡檢測。激發(fā)/發(fā)射波長為373 / 430 nm。使用DAPI濾光片或紫外長波通

(UV longpass)濾光片。

或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟。

3.固定和透化:

1)染色結(jié)束后,利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細(xì)胞;

2)小心吸走清洗液。換用新鮮配制且預(yù)熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞固定。

3)清洗細(xì)胞:吸除固定液,用適當(dāng)緩沖液沖洗細(xì)胞數(shù)次。

4)細(xì)胞透化(可選) :