ELISA試劑盒測定步驟

用于夾心ELISA試劑盒

1. 確定用于稀釋標準液，空白液和樣品的孔。為標準液準備7孔，為空白樣品準備1孔。將100μL標準品（閱讀《試劑制備》）的稀釋液，空白液和樣品各加入適當?shù)目字?。用平板封口機蓋上。在37?^o C下孵育2小時。
2. 從每個孔中除去液體，請勿清洗。
3. 向每個孔中添加100μL檢測試劑A工作溶液（即用型試劑盒中的檢測溶液A）。用平板封口器覆蓋后，在37?^o C下孵育1小時。
4. 吸出溶液并使用噴瓶，多通道移液器，歧管分配器或自動清洗器在每個孔中用350μL的1×清洗溶液洗滌，靜置1?2分鐘。將平板輕拍到吸水紙上，從所有孔中完全清除殘留的液體。徹底清洗3次。最后一次洗滌后，通過抽吸或傾析除去所有剩余的洗滌緩沖液。翻轉(zhuǎn)板并將其吸在吸水紙上。
5. 向每個孔中添加100μL檢測試劑B工作溶液（即用型試劑盒中的檢測溶液B）。用平板封口器覆蓋后，在37?^o C下孵育1小時。
6. 重復吸取/沖洗過程，總共重復5次，如步驟4所述。
7. 向每個孔中添加90μL底物溶液。蓋上新的平板封口機。在37?^o C下孵育15-25分鐘（不要超過30分鐘）。避光。添加底物溶液后，液體將變成藍色。
8. 向每個孔中添加50μL終止溶液。加入Stop溶液后，液體將變?yōu)辄S色。通過敲擊板的側(cè)面來混合液體。如果顏色變化不均勻，請輕輕敲打板以確保充分混合。
9. 除去印版底部的所有水滴和指印，并確認液體表面沒有氣泡。運行酶標儀，立即在450nm處進行測量。

用于競爭性ELISA試劑盒

1. 確定用于稀釋標準液，空白液和樣品的孔。為標準液準備7孔，為空白樣品準備1孔。分別將50μL標準品（閱讀《試劑制備》），空白和樣品的稀釋液分別加到適當?shù)目字?。然后立即向每個孔中添加50μL檢測試劑A（即用型試劑盒中的檢測溶液A）。輕輕搖動平板（建議使用微孔板振蕩器）。用平板封口機蓋上。在37?^o C下孵育1小時。檢測試劑A可能看起來混濁。溫熱至室溫，輕輕混合直至溶液均勻。?
2. 吸出溶液，并使用噴瓶，多通道移液器，歧管分配器或自動清洗器用350μL1×清洗溶液清洗每個孔，并靜置1-2分鐘。將平板輕拍到吸水紙上，從所有孔中完全清除殘留的液體。徹底清洗3次。最后一次洗滌后，通過抽吸或傾析除去所有剩余的洗滌緩沖液。翻轉(zhuǎn)板并將其吸在吸水紙上。
3. 向每個孔中添加100μL檢測試劑B工作溶液（即用型試劑盒中的檢測溶液B）。用平板封口器覆蓋后，在37?^o C下孵育1小時。
4. 重復吸取/沖洗過程，總共5次，如步驟2所述。
5. 向每個孔中添加90μL底物溶液。蓋上新的平板封口機。在37?^o C下孵育15-25分鐘（不要超過30分鐘）。避光。加入底物溶液后，液體將變成藍色。
6. 向每個孔中添加50μL終止溶液。加入Stop溶液后，液體將變?yōu)辄S色。通過敲擊板的側(cè)面來混合液體。如果顏色變化不均勻，請輕輕敲打板以確保充分混合。
7. 除去印版底部的所有水滴和指印，并確認液體表面沒有氣泡。運行酶標儀，立即在450nm處進行測量。

注意：

1. 分析準備：為每個實驗保留適當數(shù)量的孔，并從微孔板中移出多余的孔。對于傳統(tǒng)試劑盒，應將剩余的孔重新密封并保存在-20?^o C，對于即用型試劑盒應在4?^o C?儲存。 ?
2. 樣品或試劑的添加：僅使用新鮮制備的標準液。小心地將樣品添加到孔中并輕輕混合以避免起泡。不要觸摸井壁。對于該過程的每個步驟，將試劑或樣品添加到測定板上的總分配時間不應超過10分鐘。這將確保每個移液步驟的耗時相等，而不會中斷。建議重復所有標準和樣品，盡管不是必需的。為避免交叉污染，請在添加標準品，樣品和試劑之間更換移液器吸頭。另外，每種試劑都應使用分開的容器。
3. 孵育：為確保準確的結(jié)果，在孵育步驟中必須適當密封平板密封劑。在孵育步驟之間，請勿讓孔長時間暴露于裸露狀態(tài)。一旦將試劑添加到孔板中，在測試過程中任何時候都不要讓其干燥。孵育時間和溫度必須控制。
4. 洗滌：洗滌程序很關鍵。在每個步驟中徹底清除液體對于套件的良好性能至關重要。最后一次洗滌后，通過抽吸或傾析除去所有殘留的洗滌液，并除去板底上的水滴或指印。洗滌不充分將導致精度下降和吸光度讀數(shù)錯誤。
5. 反應時間的控制：加入TMB底物后觀察顏色變化（例如，每10分鐘觀察一次），如果顏色太深，請?zhí)崆疤砑覵top Solution以避免過度強烈的反應，這會導致吸光度讀數(shù)不準確。
6. TMB基材? 很容易被污染。保護它免受光以及物理污染物的侵害。?
7. 環(huán)境濕度可能會影響從試劑盒獲得的結(jié)果。如果您所在設施的濕度小于60％，則建議使用加濕器。