b. 能識別一個抗原上的多個表位,可在IP等實驗中獲得更好的結果。
c. 多抗因為靶蛋白可在多個表位上結合不止一個抗體分子,有助于放大低表達水平的靶蛋白信號。
d. 能識別出與免疫原蛋白質具有高同源性的蛋白質,或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白,例如當未測試物種中的抗原性質未知時,有時會使用多克隆抗體。e. 可識別多個結構域,即使原始抗原的一些空間結構或者序列發(fā)生小變化或者部分抗原決定簇變化,仍可以識別抗原,因此有更大的適應性。
b. 產生大量的非特異性抗體,有時可能在某些應用里產生背景信號。
IHC:兔疫組化中需要進行固定一步, 固定是為了盡量讓細胞的形態(tài)結構維持和原有的一致。這種化學物質的固定使蛋白
質變性凝固,與天然狀態(tài)下的蛋白質有了一定的區(qū)別,但是又不同WB中加熱變性變成了線性的結構。
IP/ChIP:這類實驗是用抗體去結合生理狀態(tài)下的蛋白質,因此IP和ChIP的抗體最好使用純化的天然蛋白制作的抗體。
b. 從蛋白修飾來看:天然蛋白存在復雜的翻譯后修飾。這點可以通過信息學分析進行解釋。
c.從蛋白翻譯后加工來看:翻譯后蛋白前體經切割可能會使部分蛋白分子量偏小,而天然組織中同時存在蛋白前體和切割加工后的蛋白,二者序列有相同部分,可能會產生雜帶。這點需要通過查閱與目的蛋白相關文獻進行了解。
d.從同源家族蛋白來看:當目的蛋白有同源家族蛋白時,蛋白異構體的存在可能會使分子量偏離預測分子量,因為天然樣本中由同一個mRNA不同的剪接方式進行翻譯形成的蛋白產物也會有相同的抗原表位,同時被抗體識別時會產生雜帶。
e. 從蛋白聚集形式來看:蛋白多聚體的形成,雖然還原條件可以抑制多聚體的形成,但是強烈的蛋白間相互作用在還原條件下也有可能不解聚導致條帶偏大。